Hypermetylering i cytologiska prov från cervix och utveckling av allvarliga cellförändringar
(2020) BIOK01 20201Degree Projects in Biology
- Abstract (Swedish)
- Cervixcancer kan uppkomma vid ihållande infektion med humant papillomvirus (HPV). HPV orsakar även mildare cellförändringar, CIN-I, som många gånger läker tillbaka. Patienter med cellförändringar av typ CIN-II/III löper däremot större risk att på sikt utveckla cancer. Syftet med studien var att undersöka om det fanns en korrelation mellan hypermetylering på promotorregionerna i tumörsuppressorgenerna FAM19A4 samt hsa-mir124-2 och utveckling av allvarliga cellförändringar i cervix. Cytologiska prov DNA-extraherades, DNA-koncentrationsbestämdes och bisulfit-konverterades, varpå metyleringsspecifik realtids-PCR genomfördes med QIAsure Methylation Test i Rotor-Gene Q MDx. Totalt 41 prov analyserades, varav 51.2% (21/41) prov var positiva för... (More)
- Cervixcancer kan uppkomma vid ihållande infektion med humant papillomvirus (HPV). HPV orsakar även mildare cellförändringar, CIN-I, som många gånger läker tillbaka. Patienter med cellförändringar av typ CIN-II/III löper däremot större risk att på sikt utveckla cancer. Syftet med studien var att undersöka om det fanns en korrelation mellan hypermetylering på promotorregionerna i tumörsuppressorgenerna FAM19A4 samt hsa-mir124-2 och utveckling av allvarliga cellförändringar i cervix. Cytologiska prov DNA-extraherades, DNA-koncentrationsbestämdes och bisulfit-konverterades, varpå metyleringsspecifik realtids-PCR genomfördes med QIAsure Methylation Test i Rotor-Gene Q MDx. Totalt 41 prov analyserades, varav 51.2% (21/41) prov var positiva för hypermetylering. 48.8% av de metylerade proven var endast positiva för FAM19A4 och 17.1% endast för hsa-mir124-2. Metyleringsandelen var 100% hos CIN-III-cytologier där livmoderhalsbärare utvecklat skivepitelcancer, 62.5% hos benigna cytologier där livmoderhalsbärare utvecklat skivepitelcancer, 50% hos benign cytologi där livmoderhalsbärare utvecklat CIN-III inom 24 månader samt 20% hos benign cytologi där livmoderhalsbärare utvecklat CIN-III efter 7-8 år.
Studien analyserade relativt få prover men lyckades producera resultat som går i linje med ny forskning där metylering har kopplats till allvarlig cellförändring. Studien indikerar fördelar med FAM19A4 samt hsa-mir124-2 som biomarkörer i metyleringsanalys. Sannolikheten att bli HPV-infekterad är väldigt hög och tidig upptäckt av cellförändringar efter HPV-positivt cellprov vid screening är därmed essentiell. Cytologi är en subjektiv testmetod medan metyleringsanalys är en objektiv metod som i framtiden kan vara en säkrare, enklare, mer effektiv och på sikt sannolikt storskaligt applicerbar metod, som gärna ses i kombination med adekvat HPV-test. Det talar positivt för vidare prövning av metoden, åtminstone för att användas som ett komplement till nuvarande diagnostik. (Less) - Popular Abstract (Swedish)
- Metyleringsanalys av biomarkörer vid livmoderhalscancer
Humant papillomvirus, HPV, orsakar cellförändringar i livmoderhalsen och livmoderhalsbärare går på gynekologiska cellprovskontroller vart tredje till femte år. Oftast läker cellförändringarna ut inom ett år men vissa utvecklas till mer allvarliga förändringar och tidig diagnostik är mycket viktig för bättre prognos. Därutöver är gynekologiska cellprov inte alltid träffsäkra eller objektiva, de är tidsmässigt kostsamma och livmoderhalsbäraren får ibland vänta länge i ovisshet. Tänk om det fanns ett enklare och bättre sätt?
Metyleringsanalys är en metod för att mäta nivån av mutationer, alltså metyleringar, i vårt DNA. Metylering involverar tillsättning av en metylgrupp på... (More) - Metyleringsanalys av biomarkörer vid livmoderhalscancer
Humant papillomvirus, HPV, orsakar cellförändringar i livmoderhalsen och livmoderhalsbärare går på gynekologiska cellprovskontroller vart tredje till femte år. Oftast läker cellförändringarna ut inom ett år men vissa utvecklas till mer allvarliga förändringar och tidig diagnostik är mycket viktig för bättre prognos. Därutöver är gynekologiska cellprov inte alltid träffsäkra eller objektiva, de är tidsmässigt kostsamma och livmoderhalsbäraren får ibland vänta länge i ovisshet. Tänk om det fanns ett enklare och bättre sätt?
Metyleringsanalys är en metod för att mäta nivån av mutationer, alltså metyleringar, i vårt DNA. Metylering involverar tillsättning av en metylgrupp på pyrimidinringens femte kol hos kvävebasen cytosin med hjälp av enzymgruppen metyltransferas. Metyleringar sker naturligt i kroppen men HPV-infektioner som inte läker ut orsakar ofta en högre metyleringsgrad.
Biomarkörer och metyleringsanalys
En metyleringsanalys av biomarkörerna FAM19A4 och hsa-mir124-2, två gener som skyddar kroppen mot tumörer, fastställer frekvensen av skadlig metylering i cellprovet från livmoderhalsen. Generna bidrar även till reparation av mutationer och högre frekvens av metylering i biomarkörerna ökar risken för cellförändringar.
DNA extraherades ur cellprov tagna från livmoderhalsen och mängden DNA koncentrationsbestämdes med spektrofotometri. Därefter omvandlades DNA med bisulfit, ett salt med vätesulfitjonen HSO3- som omvandlar icke-metylerat cytosin till uracil, varpå en PCR-amplifiering översätter uracil till tymin. PCR är en metod som kopierar upp DNA-sekvenser men det metylerade 5-metylcytosinet (5-mC) kopieras upp icke-omvandlat. Metyleringsanalys fastställde om cellprovet var positivt för hypermetylering. 100% av DNA-prov med allvarliga cellförändringar samt 62.5% av DNA-prov med benign cellförändring identifierades som positiva för hypermetylering och därigenom skivepitelcancer. Övervägande majoritet (87.8%) av proven var positiva för HPV och 51.2% av de HPV-positiva proven var hypermetylerade.
Metyleringsanalys av utvalda biomarkörer på molekylär nivå är därmed ett användbart verktyg för identifiering av cellförändringar i ett tidigt skede. Resultaten talar positivt för vidare forskning i lämpliga biomarkörer för metyleringsanalys, åtminstone som ett komplement till nuvarande screening för livmoderhalscancer.
Handledare: Ola Forslund, Assistant Professor, Medicinsk Mikrobiologi
Examensarbete, 15hp, Molekylärbiologi, 2020
Biologiska Institutionen, Lunds Universitet (Less)
Please use this url to cite or link to this publication:
http://lup.lub.lu.se/student-papers/record/9021478
- author
- Alssamaray, Jacob Oscar
- supervisor
-
- Ola Forslund LU
- organization
- course
- BIOK01 20201
- year
- 2020
- type
- M2 - Bachelor Degree
- subject
- language
- Swedish
- id
- 9021478
- date added to LUP
- 2020-06-23 10:05:40
- date last changed
- 2020-06-23 10:05:40
@misc{9021478,
abstract = {{Cervixcancer kan uppkomma vid ihållande infektion med humant papillomvirus (HPV). HPV orsakar även mildare cellförändringar, CIN-I, som många gånger läker tillbaka. Patienter med cellförändringar av typ CIN-II/III löper däremot större risk att på sikt utveckla cancer. Syftet med studien var att undersöka om det fanns en korrelation mellan hypermetylering på promotorregionerna i tumörsuppressorgenerna FAM19A4 samt hsa-mir124-2 och utveckling av allvarliga cellförändringar i cervix. Cytologiska prov DNA-extraherades, DNA-koncentrationsbestämdes och bisulfit-konverterades, varpå metyleringsspecifik realtids-PCR genomfördes med QIAsure Methylation Test i Rotor-Gene Q MDx. Totalt 41 prov analyserades, varav 51.2% (21/41) prov var positiva för hypermetylering. 48.8% av de metylerade proven var endast positiva för FAM19A4 och 17.1% endast för hsa-mir124-2. Metyleringsandelen var 100% hos CIN-III-cytologier där livmoderhalsbärare utvecklat skivepitelcancer, 62.5% hos benigna cytologier där livmoderhalsbärare utvecklat skivepitelcancer, 50% hos benign cytologi där livmoderhalsbärare utvecklat CIN-III inom 24 månader samt 20% hos benign cytologi där livmoderhalsbärare utvecklat CIN-III efter 7-8 år.
Studien analyserade relativt få prover men lyckades producera resultat som går i linje med ny forskning där metylering har kopplats till allvarlig cellförändring. Studien indikerar fördelar med FAM19A4 samt hsa-mir124-2 som biomarkörer i metyleringsanalys. Sannolikheten att bli HPV-infekterad är väldigt hög och tidig upptäckt av cellförändringar efter HPV-positivt cellprov vid screening är därmed essentiell. Cytologi är en subjektiv testmetod medan metyleringsanalys är en objektiv metod som i framtiden kan vara en säkrare, enklare, mer effektiv och på sikt sannolikt storskaligt applicerbar metod, som gärna ses i kombination med adekvat HPV-test. Det talar positivt för vidare prövning av metoden, åtminstone för att användas som ett komplement till nuvarande diagnostik.}},
author = {{Alssamaray, Jacob Oscar}},
language = {{swe}},
note = {{Student Paper}},
title = {{Hypermetylering i cytologiska prov från cervix och utveckling av allvarliga cellförändringar}},
year = {{2020}},
}