Evaluation of the miR30E as a system for RNAi delivery to human hematopoietic stem cells
(2019) MOBY01 20191Degree Projects in Molecular Biology
- Abstract
- Hematopoietic stem cells (HSCs) are of great importance for the body and can be used to treat diseases such as leukemia or autoimmune conditions. To be able to use HSCs more extensively in therapies we need to know more about how they are being regulated, one way to do this is by knocking down genes with RNA interference. In this project we test a new micro RNA (miRNA), called miR30E, to investigate if there are any toxicity effects in HSCs and to determine the knockdown efficiency of the target protein. We transduced CD34+ cells with lentivirus containing the miR30E and analyzed the toxicity and knockdown effects on several time points through fluorescence activated cell sorting (FACS) analysis. We did not discover any sign of toxicity... (More)
- Hematopoietic stem cells (HSCs) are of great importance for the body and can be used to treat diseases such as leukemia or autoimmune conditions. To be able to use HSCs more extensively in therapies we need to know more about how they are being regulated, one way to do this is by knocking down genes with RNA interference. In this project we test a new micro RNA (miRNA), called miR30E, to investigate if there are any toxicity effects in HSCs and to determine the knockdown efficiency of the target protein. We transduced CD34+ cells with lentivirus containing the miR30E and analyzed the toxicity and knockdown effects on several time points through fluorescence activated cell sorting (FACS) analysis. We did not discover any sign of toxicity and there were significant knockdown effects of target proteins. (Less)
- Popular Abstract (Swedish)
- En liten molekyl med en stor uppgift
Alla människor ser olika ut, vi har olika hårfärg, är olika långa och har olika hudfärg. Har du någonsin undrat vad det är som gör dig till dig? Svaret är till stor del dina gener. Vi består av celler och varje cell i din kropp har alla dina gener som behövs för att skapa dig. Man kan likna en gen vid ett recept som cellen använder för att veta hur den ska tillverka ett visst protein. Alla gener består av DNA och beskriver hur olika proteiner ska tillverkas. Generna befinner sig i en cellkärna och de som tillverkar proteinerna befinner sig på utsidan av denna. För att proteiner ska kunna tillverkas måste cellen göra en RNA-kopia av genen, som sedan kan skickas ut till de som tillverkar proteinerna... (More) - En liten molekyl med en stor uppgift
Alla människor ser olika ut, vi har olika hårfärg, är olika långa och har olika hudfärg. Har du någonsin undrat vad det är som gör dig till dig? Svaret är till stor del dina gener. Vi består av celler och varje cell i din kropp har alla dina gener som behövs för att skapa dig. Man kan likna en gen vid ett recept som cellen använder för att veta hur den ska tillverka ett visst protein. Alla gener består av DNA och beskriver hur olika proteiner ska tillverkas. Generna befinner sig i en cellkärna och de som tillverkar proteinerna befinner sig på utsidan av denna. För att proteiner ska kunna tillverkas måste cellen göra en RNA-kopia av genen, som sedan kan skickas ut till de som tillverkar proteinerna (se figur).
En viss typ av cell heter blodstamcellen, den kan skapa nya blodceller som bär syre från lungorna till musklerna eller nya immunceller som försvarar kroppen från infektioner och sjukdomar. Blodstamceller är viktiga för kroppen och kan användas för att bota olika sjukdomar, som blodcancer eller autoimmuna sjukdomar. Ibland kan en sjukdom uppkomma genom att det blir något fel på en gen. Då kommer cellen skicka ut en felaktig kopia och skapa ett felaktigt och dåligt protein. När detta händer hade det varit bra om man hade kunnat stoppa RNA-kopian, så att cellen inte längre kan tillverka det dåliga proteinet. Genom RNA interferens, ett system som finns naturligt i cellen, går det att stoppa RNA från att nå proteintillverkarna.
Vi har försökt stoppa RNA-kopior från två gener i blodstamceller med en ny sorts molekyl. Vi ville undersöka om molekylen var farlig för cellerna och om den kunde ta bort genkopiorna så att cellen inte längre kunde tillverka proteinerna. När vi försökte ta bort kopiorna för den första genen lyckades molekylen vi testade ta bort så många RNA-kopior att cellerna inte längre kunde producera något protein alls. Molekylen verkade inte heller vara farlig för cellerna, eftersom den inte påverkade dem på något negativt sätt.
När vi försökte ta bort RNA-kopiorna för det andra proteinet gick det inte alls lika bra, ibland tog molekylen bort nästan alla RNA-kopior och ibland tog den inte bort några alls. För det mesta kunde cellerna fortfarande tillverka protein eftersom molekylen inte lyckades ta bort RNA-kopiorna. Efter att ha försökt ta reda på varför molekylen bara fungerade ibland, kom vi på att det kan ha att göra med att molekylen sätter sig på olika delar av kopian när den tar bort den. Vissa gånger sätter sig molekylen i början av kopian, andra gånger i slutet eller i mitten. Vi jämförde våra resultat med de från det första proteinet och kom fram till att det är bättre om molekylen sätter sig på vissa specifika delar av kopian.
Om detta stämmer vet vi vad som styr hur bra vår molekyl kan ta bort RNA-kopior. Då kan vi tillverka fler molekyler som bara sätter sig på bra platser så att RNA-kopiorna tas bort direkt. När vi gör det kommer molekylerna alltid lyckas ta bort alla kopior så att inga proteiner kan tillverkas. Detta kan komma att användas i framtida experiment för att ta fram läkemedel mot olika sjukdomar.
Examensarbete för kandidatexamen i Molekylär Biologi, 30 hp 2019 Biologiska institutionen, Lunds Universitet
Handledare: Jonas Larsson, Molekylär medicin och genterapi (Less)
Please use this url to cite or link to this publication:
http://lup.lub.lu.se/student-papers/record/8990493
- author
- Sjöberg, Julia
- supervisor
- organization
- course
- MOBY01 20191
- year
- 2019
- type
- M2 - Bachelor Degree
- subject
- language
- English
- id
- 8990493
- date added to LUP
- 2019-07-09 16:07:22
- date last changed
- 2019-07-09 16:14:59
@misc{8990493,
abstract = {{Hematopoietic stem cells (HSCs) are of great importance for the body and can be used to treat diseases such as leukemia or autoimmune conditions. To be able to use HSCs more extensively in therapies we need to know more about how they are being regulated, one way to do this is by knocking down genes with RNA interference. In this project we test a new micro RNA (miRNA), called miR30E, to investigate if there are any toxicity effects in HSCs and to determine the knockdown efficiency of the target protein. We transduced CD34+ cells with lentivirus containing the miR30E and analyzed the toxicity and knockdown effects on several time points through fluorescence activated cell sorting (FACS) analysis. We did not discover any sign of toxicity and there were significant knockdown effects of target proteins.}},
author = {{Sjöberg, Julia}},
language = {{eng}},
note = {{Student Paper}},
title = {{Evaluation of the miR30E as a system for RNAi delivery to human hematopoietic stem cells}},
year = {{2019}},
}