Escherichia coli, en proteinfabrik - Uttryck av rekombinanta proteiner i E. coli stammar som saknar proteaserna Lon och OmpT
(2018) MOBK01 20181Degree Projects in Molecular Biology
- Popular Abstract (Swedish)
- Escherichia coli, en proteinfabrik
Under de senaste åren har det skett en stor utveckling av system för produktion av rekombinanta proteiner i mikroorganismer. Detta har stor betydelse för dess användning till exempel inom läkemedelsindustrin. Ett rekombinant protein kodas av rekombinant DNA, vilket skapas när DNA från olika organismer sammanfogas till exempel när man sätter in en gen från en art i en annan arts arvsmassa. Vid produktion av rekombinanta proteiner sätter man in genen, som kodar för proteinet man vill framställa, i en värdorganism (till exempel en bakterie). Värdorganismen är den organism som sedan producerar det rekombinanta proteinet.
Escherichia coli används ofta som värdorganism. En faktor som skiljer mellan olika... (More) - Escherichia coli, en proteinfabrik
Under de senaste åren har det skett en stor utveckling av system för produktion av rekombinanta proteiner i mikroorganismer. Detta har stor betydelse för dess användning till exempel inom läkemedelsindustrin. Ett rekombinant protein kodas av rekombinant DNA, vilket skapas när DNA från olika organismer sammanfogas till exempel när man sätter in en gen från en art i en annan arts arvsmassa. Vid produktion av rekombinanta proteiner sätter man in genen, som kodar för proteinet man vill framställa, i en värdorganism (till exempel en bakterie). Värdorganismen är den organism som sedan producerar det rekombinanta proteinet.
Escherichia coli används ofta som värdorganism. En faktor som skiljer mellan olika E. coli stammar är närvaron av generna lon och ompT. Genen lon kodar för ett protein som kallas Lon, vilket bryter ned proteiner i cytoplasman hos E. coli. Genen ompT kodar för ett protein som kallas OmpT. Det finns i yttermembranet och bryter ned extracellulära proteiner.
Syftet med vår studie var att undersöka om stammar av E. coli, där Lon och OmpT saknades, hade förbättrade egenskaper för produktion av rekombinanta proteiner. Detta gjordes genom att jämföra stammar som hade lon och ompT med stammar som saknade någon av dem eller båda. Stammen med både lon och ompT och stammen där bara lon saknades fanns redan tillgängliga. De andra två stammarna skapade vi själva. Vi jämförde egenskaperna för produktion av rekombinanta proteiner genom att mäta mängden fluorescerande protein bakteriestammarna framställt under en viss tid och genom att mäta tillväxten. Tillväxten mättes genom absorbansmätning (absorbansen ökar då bakterier tillväxer för näringslösningen de växer i blir grumligare).
På grund av komplikationer vid framställningen av de nya stammarna kunde vi inte studera påverkan av ompT utan bara lons påverkan. Absorbansen vid tillväxtförsöket visade att stammarna med lon tillväxt ungefär lika bra som stammarna utan. Flourescensmätningarna visade att mängden rekombinanta proteiner de producerat inte heller skiljde avsevärt mellan de två stammarna. Från våra resultat kunde därför slutsatsen dras att närvaron av lon inte verkar förändra egenskaperna för produktion av rekombinanta proteiner.
Examensarbete för kandidatexamen i Molekylär Biologi 15 hp 2018
Biologiska institutionen, Lunds Universitet
Handledare: Claes von Wachenfeldt
Handledarens Avdelning: Lunds universitet, biologiska institutionen, mikrobiologigruppen (Less)
Please use this url to cite or link to this publication:
http://lup.lub.lu.se/student-papers/record/8962693
- author
- Mattsson, Amanda
- supervisor
- organization
- course
- MOBK01 20181
- year
- 2018
- type
- M2 - Bachelor Degree
- subject
- language
- Swedish
- id
- 8962693
- date added to LUP
- 2018-10-31 14:24:38
- date last changed
- 2018-10-31 14:24:38
@misc{8962693,
author = {{Mattsson, Amanda}},
language = {{swe}},
note = {{Student Paper}},
title = {{Escherichia coli, en proteinfabrik - Uttryck av rekombinanta proteiner i E. coli stammar som saknar proteaserna Lon och OmpT}},
year = {{2018}},
}