Skip to main content

LUP Student Papers

LUND UNIVERSITY LIBRARIES

Construction of fluorescent reporter for estimating Spx activity in single cells

Valtinat, Christer (2020) MOBK01 20192
Degree Projects in Molecular Biology
Popular Abstract (Swedish)
Fluorescerande protein för att mäta aktivitet i celler

För undersökning av proteiner i celler är det viktigt att rätt metod används och att den fungerar för det protein man är intresserad av. Ibland kan det finnas metoder som existerar från tidigare undersökningar. I detta arbete används cyan fluorescerande protein (CFP) för att mäta aktiviteten av transkription faktorn Spx i enskilda celler. För att göra detta har bakterien Bacillus subtilis transformerats för att skapa olika genotyper. Dessa utsattes för stress och bilder med fluorescens mikroskop togs för att analysera ljusintensiteten av CFP i cellerna.

För att se ifall Spx har någon påverkar på CFP användes promotorn för trxB genen för att agera som en koppling, eftersom Spx i... (More)
Fluorescerande protein för att mäta aktivitet i celler

För undersökning av proteiner i celler är det viktigt att rätt metod används och att den fungerar för det protein man är intresserad av. Ibland kan det finnas metoder som existerar från tidigare undersökningar. I detta arbete används cyan fluorescerande protein (CFP) för att mäta aktiviteten av transkription faktorn Spx i enskilda celler. För att göra detta har bakterien Bacillus subtilis transformerats för att skapa olika genotyper. Dessa utsattes för stress och bilder med fluorescens mikroskop togs för att analysera ljusintensiteten av CFP i cellerna.

För att se ifall Spx har någon påverkar på CFP användes promotorn för trxB genen för att agera som en koppling, eftersom Spx i vanliga fall ökar transkriptionen av trxB under stressade förhållanden. För att undersöka ifall det faktiskt var trxB promotorn som inverkade på transkriptionen av CFP skapades en kontrollgrupp utan promotorn. De andra strängarna som skapades var en där genen för Spx hade slagits ut, för att mäta bakgrunds ljus från CFP, en där proteinet yjbH hade slagits ut. YjbH är ett protein som hjälper till med nedbrytning av Spx, därför slogs det ut för att kunna mäta vad den maximala halten av Spx kan vara i en cell. Den sista strängen där Spx inte kunde brytas ner alls och vars transkription inducerades av IPTG. Vad som benämns vildtyp i detta fall är den sträng där endast trxB promotorn och CFP har transformerats in.

Resultat
Kontrollgenotypen och den genotyp där Spx var utslagen visade inget uttryck av CFP vilket tyder på att, trxB promotor är nödvändig för att estimera mängden Spx genom CFP i cellen och att det är närvaron av Spx som gör att CFP uttrycks. Det var även signifikanta skillnader mellan strängarna där Spx inte kan brytas ner och vildtypen.

Detta i sin tur innebär att det är möjligt att estimera aktiviteten av Spx i celler med hjälp av CFP. Vilket innebär att metoden funkar och kan användas vidare för andra experiment.

Examensarbete för kandidatexamen i Molekylärbiologi 15 hp 2020
Biologiska institutionen, Lunds universitet
Handledare: Claes von Wachenfeldt
Mikrobiologi gruppen (Less)
Please use this url to cite or link to this publication:
author
Valtinat, Christer
supervisor
organization
course
MOBK01 20192
year
type
M2 - Bachelor Degree
subject
language
English
id
9006771
date added to LUP
2020-03-17 14:12:55
date last changed
2020-03-17 14:12:55
@misc{9006771,
  author       = {{Valtinat, Christer}},
  language     = {{eng}},
  note         = {{Student Paper}},
  title        = {{Construction of fluorescent reporter for estimating Spx activity in single cells}},
  year         = {{2020}},
}